A cromatografia líquida é uma técnica analítica de separação de substâncias químicas. Dessa forma, é uma técnica utilizada para identificar, quantificar e/ou purificar componentes individuais que pertencem a uma mistura. Existem dois tipos principais de equipamentos: HPLC e LC-MS. Em contrapartida, seu resultado pode ser afetado pela qualidade da água.
Nesse sentido, para entender mais sobre a importância da água para os equipamentos de HPLC e LC-MS, prossiga com a leitura deste artigo!
O que é a técnica de HPLC?
A Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC) é uma técnica utilizada na identificação, quantificação, separação e purificação de compostos individuais numa mistura. Contudo, ela é também conhecida como Cromatografia Líquida de Alta Performance.
E como funciona? A mistura com a amostra é passada, junto com um solvente líquido sob alta pressão, por uma coluna com material adsorvente sólido. Por isso, com a ajuda de bombas, é gerada a pressão dentro do equipamento de HPLC.
A princípio, cada composto da mistura interage de forma diferente com o material adsorvente, o que gera taxas de fluxo variáveis. Com isso, ocorre a separação desses compostos conforme eles passam para fora da coluna.
O que é fase estacionária e fase móvel?
Dentro do equipamento de HPLC, há a fase estacionária e a móvel. A fase estacionária corresponde ao material adsorvente, que costuma ser granular e constituído de partículas sólidas, como por exemplo, a sílica.
Já a fase móvel é constituída de um líquido pressurizado, que costuma ser a mistura de solventes como água e líquidos orgânicos (metanol, por exemplo).
Como é processado o resultado da separação?
O detector do equipamento é conectado a um microprocessador digital e um software de utilizador para a aquisição e análise dos dados. Sendo assim, os compostos que foram separados são visualizados como picos e a área do pico é proporcional à concentração do composto.
Quanto maior a resolução dos picos, melhor foi a separação dos compostos.
Onde é utilizada a cromatografia líquida de alta performance?
A técnica cromatográfica apresenta uma ampla variedade de aplicações, como por exemplo:
— Química analítica;
— Bioquímica;
— Indústria farmacêutica;
— Forense;
— Pesquisa de alimento;
Entre outras áreas.
O que é a técnica de LC-MS?
A cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas (LC-MS) é uma técnica que permite estudar os analitos com base na relação massa/carga e abundância relativa, de macro e micromoléculas, dependendo do seu perfil de fragmentação. Desde que os analitos estejam na fase gasosa e sejam ionizáveis.
Por ser uma técnica que possui maior sensibilidade e os cuidados práticos com o preparo de amostras são mais críticos, os contaminantes da água impactam de forma extremamente negativa nos resultados.
Por isso que, aqui, os padrões de qualidade exigidos da água são mais altos do que em HPLC, em contrapartida, um sistema de ultrapurificação de água adequado poderá atender às duas técnicas.
O impacto da água na cromatografia líquida
“Na hora de realizar o experimento, você deve adotar a água mais adequada para o estudo.”
A água é um insumo que está presente em diversas etapas na cromatografia líquida, portanto sua qualidade tem um impacto direto nos resultados. Dentre as aplicações da água estão a preparação da amostra, preparo dos padrões, brancos, fase móvel, limpeza dos instrumentos, entre outras. Afinal, a água é o reagente mais comum no equipamento de cromatografia líquida.
Por esse motivo é importante atentar-se aos principais contaminantes que impactam nesse tipo de análise, já que o uso de água contaminada afeta a resolução, criando picos fantasmas, alterando a seleção da fase estacionária e impactando nas linhas de base na separação.
Além disso, a contaminação da água pode criar acúmulo na fase estacionária, causando o bloqueio da coluna. Isso cria aumento da pressão no equipamento e causa a demora na execução da amostra.
Tipos de contaminantes na água que impactam na cromatografia líquida
Afinal, quais são os principais contaminantes que impactam negativamente no resultado da cromatografia?
— Contaminantes orgânicos: como a cromatografia líquida é uma técnica indicada para análise de compostos orgânicos, a presença dessa classe de contaminantes na água promove imprecisão nos resultados, ruídos na linha de base e reduz a vida útil da coluna;
— Partículas e coloides: causa danos à instrumentação, principalmente na bomba e injetor, além de aumentar a pressão de retorno no sistema;
— Íons: pode afetar as separações cromatográficas e dificultar a leitura dos dados pela formação de adutos.
Em resumo, os principais impactos que a qualidade da água pode causar na cromatografia líquida são:
— Dificuldades na interpretação dos resultados;
— Resultados errôneos ou imprecisos;
— Perda de amostras e/ou reagentes;
— Redução da vida útil da coluna;
— Danos à instrumentação;
— Perdas de tempo por repetição de análises e detecção de problemas.
4 maneiras de melhorar a qualidade da água em LC-MS
Certo, a qualidade da água impacta muito na cromatografia HPLC e LC-MS, podendo gerar efeitos negativos se estiver contaminada. Então, como aumentar os padrões de qualidade?
Comece a análise com a melhor água
A água natural apresenta uma série de contaminantes, o que exige que seja cuidadosamente purificada. Por ser uma técnica capaz de detectar compostos orgânicos em níveis de traços, a cromatografia líquida é extremamente sensível a contaminação. Por isso faz-se necessário o uso de água com o mais alto grau de pureza disponível: a água ultrapura, também conhecida como água tipo I.
Tenha cuidado ao manusear a água
Como a água ultrapura é um excelente solvente, uma vez dispensada do uso, pode ser contaminada rapidamente por uma grande variedade de fontes, como o próprio CO2 do ar, orgânicos voláteis no ambiente, resquícios de contaminantes nas vidrarias ou até pelo contato humano.
Por isso, escolha o recipiente apropriado para o líquido, preferindo o uso de vidro âmbar e evitando o uso de recipientes plásticos.
Tenha um sistema de purificação que combine diferentes tecnologias de purificação
Apenas uma tecnologia de purificação não é capaz de remover todos os contaminantes da água. Cada tipo de contaminante se comporta de uma forma diferente, sendo assim, requer tecnologias distintas para sua remoção. Um sistema de ultrapurificação de água combina uma série de técnicas de filtração e monitoramento para que a água produzida atinja os requisitos para água ultrapura e seja adequada para a cromatografia líquida.
Tenha atenção com a manutenção do equipamento
Não esqueça de realizar a manutenção adequada e regular do sistema de purificação da água. Isso prolonga a vida útil do equipamento e mantém a água ultrapura sempre numa qualidade ideal. Por isso, realize periodicamente manutenções bem como a substituição dos cartuchos de purificação, das lâmpadas UV e dos filtros finais conforme as recomendações do fabricante.
Conclusão
Para uma excelente análise HPLC e LC-MS, é importante a presença de uma água de ótima qualidade. Para isso, você deve adotar diferentes mecanismos de purificação, que eliminem todos os tipos de contaminantes presentes.
Com uma água ultrapura, fica mais fácil de realizar a análise através dos equipamentos de HPLC e LC-MS!
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